Agnieszka z Montepulciano urodziła się 28 stycznia 1268 roku w Gracciano Vecchio koło Montepulciano, w szlacheckiej rodzinie Lorenza i Marii Segni. Według legendy, jej narodzinom towarzyszyło unoszące się w powietrzu światło, które otaczało rodzinny dom. Od wczesnego dzieciństwa wyróżniała się niezwykłą pobożnością. Gdy miała sześć lat, prosiła rodziców o pozwolenie na wstąpienie do klasztoru, jednak spotkała się z odmową. Dopiero niecodzienne wydarzenie skłoniło ich do zmiany decyzji. W wieku dziewięciu lat została oddana na wychowanie do klasztoru franciszkańskiego del Sacco. W czternastym roku życia złożyła śluby zakonne, a rok później, wraz z grupą zakonnic i pod kierunkiem ksieni Proceno, przeniosła się do klasztoru niedaleko Viterbo. Zmarła 20 kwietnia 1317 roku w Montepulciano.